Ana Sayfa | Site Ağacı | Site Hakkında | Site İçi Arama | Bize Ulaşın  
Analitik Kimya
Anorganik Kimya
Fizikokimya
Polimer Kimyası
Organik Kimya
Genel Kimya
Enstrümental Kimya
Su ve Çevre Kimyası
Gıda Kimyası
Ambalaj Kimyası
Deney Öncesi Hazırlık
Gıda Analizleri
Yem Analizleri
Su Analizleri
Temizlik Mad. Analizleri
Besinsel Lif

Besinsel Lif Analizi

Kullanılan Kimyasallar

Toplam Besinsel Lif Kiti (Merck 1.12979) :      α -amylase çözeltisi                      5 mL

                                                                         Protease çözeltisi                          5 mL

                                                                         Amyloglucosidase çözeltisi          3x15 mL

    

MES/TRİS tamponu: 19.52 g  2(N-morfolin)etan sülfonik asit (MES) (Merck1.06126) ve 14.2g tris(hidroksimetil)aminometan (TRİS) (Merck1.08382) 1.7 L deiyonize suda çözülür. Çözeltinin pH’ sı 6 N NaOH ile 8.2’ ye ayarlanır. Çözeltinin son hacmi 2 L ye saf su ile tamamlanır.

 

0.561 N HCl asit çözeltisi: 700 mL saf su üzerine 93.5 ml 6 N HCl asit koyularak 1Lt ye tamamlanır.

%95‘ lik etil alkol :95 mL mutlak (Merck 1.00983) etanol üzerine 5 mL saf su eklenir

%78‘ lik etil alkol : 78 mL mutlak (Merck 1.00983) etanol üzerine 5 mL saf su eklenir

Aseton (Merck 1.00014)

Petrol Eteri (Merck 1.01775)

Kullanılan Malzemeler

Falcon tüpü 50 mL
Gooch krozesi
Tüplük (50 mLFalcon tüpüne uygun)
Su Banyosu
Vakum pompası veya su trompu

Erlen
(250 mL)
Nuche erleni
Etüv
Pipet (5,10 mL)
Mikropipet (0-200µl aralığında)
Sarı pipet ucu
Vorteks

 

Deneyin yapılışı

Eğer örnek %5 ten fazla yağ içeriyor ise örnekteki yağ uzaklaştırılır. Örnek 3 defa 25 mL petrol eteri ile çalkalanıp süzülür. Daha sonra elde edilen yağsız örnek 70 C°’ da 2-3 saat kurutulur. Yağsız örnek  boyutu 0.3-0.5 mm mesh olacak şekilde öğütülür.

Enzimatik parçalanma:

  • 50 mL falcon tüplerine1 g örnek tartılır. Üzerine 40 mL MES/TRIS çözeltisi eklenerek çözelti vortexlenir.
  • 50 µl α -amylase çözeltisi eklenir, vortexlenir, 95-100C° ‘da 30 dakika bekletilir. Çözelti 60 C°’a soğutulur.
  • 50 µl protease çözeltisi eklenir, vortexlenir, 60 C°’da -  30 dakika bekletilir.
  • 5 mL 0.561 N HCL eklenerek çözeltinin pH 4.1-4.8 aralığına getirilir.
  • 150 µl amyloglucosidase çözeltisi eklenir, vortexlenir, 60 C° -  30 dakika bekletilir.
Toplam Besinsel Lif analizi yapılıcak ise;
  • Enzimatik parçalanma işlemi bittikten sonra örnek bir erlene 60 C° sıcaklıktaki 220 mL etanol  ile yıkanarak aktarılır.
  • Çözelti ağzı kapatılarak 1 saat bekletir.
  • Vakum yardımı ile daha önce sabit tartıma getirilmiş gooch krozesinden süzlür
  • Çökelek %78’lik etanol (3x15 mL) , %95’lik etanol (2x10 mL) ve  aseton (3x10 mL) ile yıkanır.
  • 105 C°’da 1 gece etüvde bekletilir.
  • Tartım alınır (m2)
  • Parallerden birinde kül (k), diğerinde protein (p) analizi yapılır.
Çözünen ve Çözünmeyen  Besinsel Lif analizleri yapılacak ise;

Am
yloglucosidase enzimi eklenip 30 dakika beklendikten sonra çözelti daha önceden sabit tartıma getirilen gooch krozesinden süzülür. Çökelek 70 C° sıcaklıktaki saf su ile (2x10mL) yıkanır. Çökelek ile çözünmeyen besinsel lif, çözelti ile ise çözünen besinsel lif analizi yapılır.

Çözünen Besinsel Lif analizi;

  • Süzüntünün ağırlığı 80 g olana kadar saf su eklenir
  • Önceden 60°C’ye ısıtılmış % 95 ‘ lik 320 ml etanol eklenir
  • Çökme işleminin tamamlanması için 1 saat bekletilir.
  • Çözelti sabit tartıma getirilmiş gooch krozesinden (cam kroze) süzülür.
  • Çökelek %78 ‘lik etanolle (3x15 ml), %95’ lik etanolle (2x10 ml ) ve son olarak asetonla (3x10 ml ) yıkanır.
  • 105 C°’da 1 gece etüvde bekletilir.
  • Tartım alınır (m3)
  • Parallerden birinde kül (k), diğerinde protein (p) analizi yapılır.
Çözünmeyen Besinsel Lif analizi;
  • Çökelek % 95’lik etanol ile (2x10mL) ve aseton ile (2x10mL) yıkanır.
  • 105 C°’da 1 gece etüvde bekletilir.
  • Tartım alınır (m4)
  • Parallerden birinde kül (k), diğerinde protein (p) analizi yapılır.

Hesaplamalar

Kül ve protein deney sonuçları bazen negatif sonuc verebilir. Negatif değerler hesaplamalara katılmamalıdır.

% Toplam diyet lif = [(m2 - m1) -( k+ p ) x100] /  m

% Çözünmeyen Diyet Lif = [(m4 - m1) - ( k+ p ) x100] / m

% Çözünen Diyet Lif = [(m3 - m1) - ( k+ p ) x100] /  m

m: alınan örnek miktarı

Not: Analiz, örnek miktarı ve buna bağlı olarak kimyasalların miktarları 4 'e bölünerek yapılabilinir (denenmiştir). Hangi firmanın enzimleri kullanılacak ise enzim aktiviteleri nedeniyle enzim miktarları  firmanın belirttigi miktarlarda kullanılmalıdır.  Protein analizi, sonucun genellikle 0 çıkması nedeniyle yapılmamaktadır.

Test kiti içerisinde yer alan orjinal kullanma kılavuzu için tıklayınız.


 


 

Adobe Acrobat Reader Adobe Acrobat Reader


Belge Ziyaretçi Sayısı: 9453
Kitaplar
Tezler
Tez Arama
Sözlük
Yenilenen ORLAB katalogu için info@orlab.com.tr adresinden istekte bulunabilirsiniz.
Ayrıntılar




NMR kimyasalları hakkında herşey www.nmrkimyasallari.com
Ayrıntılar




LabSafe Laboratuvar ve İş Güvenliği Kataloğu
Ayrıntılar




Merck Laboratuvar El Kitabı II. baskısı çıktı.
Ayrıntılar




 
Son Eklenen Belge Tarihi: 07.08.2021 • Toplam Ziyaretçi Sayısı : 25042313
Her hakkı saklıdır © Kimyaevi
 
Orlab Merck